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KOP293瞬时转染蛋白表达系统

发布时间:2020-11-11   热度:

KOP293瞬时转染蛋白表达系统

本系统适合于HEK-293细胞及其它293细胞的高密度悬浮培养、DNA瞬时转染及蛋白表达。

本实验方法根据HEK-293细胞的锥形瓶悬浮培养经验总结而成,也适用于其它悬浮培养方式的293细胞的DNA转染及蛋白表达。


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转染细胞的准备


1、转染前需确定细胞密度及存活率。为确保转染效果,建议使用生长处于指数期(密度约为2~4×10^6个/毫升)、存活率大于98% 的细胞;

2、转染前细胞无需离心。若细胞密度为2.0×10^6个/ml时,则可直接转染,若细胞密度>2.0×10^6个/ml,则需兑入新鲜的KOP293培养液,将细胞密度稀释成2×10^6个/毫升。客户也可根据自身经验摸索合适的转染密度;

3、细胞准备好后恒温震荡培养10min后开始转染(5%CO2,37℃、120rpm)。



瞬时转染(以转染100ml细胞悬液为例)


1、准备两支15ml无菌离心管,在其中一支中加入5ml KPM和100μg无菌质粒DNA,轻轻吹打混匀。取另一支离心管,加入5ml KPM和500μl TA-293转染试剂,轻轻吹打混匀;

2、将含有转染试剂的离心管中所有液体转移至含质粒的离心管中,轻轻吹打混匀;

3、将质粒-载体复合物室温下静置孵育10分钟;

4、从恒温摇床中取出细胞,边摇边加入制备好的质粒-载体复合物,放回CO2恒温摇床中震荡培养。3小时后可根据需要加入适量抗生素。


产物表达与检测


1、转染24小时后加入600 μl 293细胞蛋白表达增强剂(KE-293),以增加产物表达量; 

2、可选择在转染24小时后添加一次瞬时转染营养添加剂(KT-Feed 50×),适当提高产物的表达量; 

3、根据产品特性,在转染后第2至6天测定产物表达量; 

4、多数重组蛋白的表达量在转染后第6天左右可达到最高值,客户可根据细胞状态及表达量选择适宜的收获时间。


原文链接:https://mp.weixin.qq.com/s/Q4PuGkGigGXaZKg3WyW7DA

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